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慢病毒的濃縮與純化——超速離心沉淀法
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創(chuàng)建時(shí)間：
2012-10-01 21:49:10

實(shí)驗(yàn)概要

本實(shí)驗(yàn)介紹了用超速離心沉淀法濃縮與純化慢病毒的操作步驟。

主要試劑

1. 70%乙醇

2. 20%的蔗糖溶液

3. PBS緩沖液

主要設(shè)備

1. Ultra-clear SW28離心管

2. 超凈工作臺(tái)

3. 紫外燈

4. 10ml移液管

5. Beckman SW28 超速離心轉(zhuǎn)頭

6. 高速離心機(jī)

7. 50ml錐底離心管

8. 低溫冰箱

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 取6個(gè)Ultra-clear SW28離心管，用70%乙醇消毒后，放在超凈工作臺(tái)中打開(kāi)紫外燈繼續(xù)消毒30分鐘。

2. 每個(gè)Ultra-clear SW28離心管中加入約32ml的預(yù)先處理的病毒上清液。

3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。將移液管一直插入到離心管的底部，緩慢將蔗糖溶液打出4 ml。同樣地，將剩下8 ml的蔗糖溶液分別加入到另兩個(gè)離心管中。另取一支干凈的移液管，對(duì)剩下3管進(jìn)行同樣處理。

4. 用PBS調(diào)整各管的重量，使對(duì)應(yīng)的離心管之間的重量相差不超過(guò)0.1g。

5. 按次序?qū)⑺?個(gè)離心管放入Beckman SW28 超速離心轉(zhuǎn)頭中。

6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 離心2小時(shí)。

7. 小心將管子從轉(zhuǎn)頭中取出。倒掉上清，將離心管倒扣在紙巾上放置10分鐘使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底應(yīng)當(dāng)有可見(jiàn)的沉淀。

8. 每管中加入100ml 不含鈣和鎂的PBS洗下沉淀。

9. 將SW28超速離心管插入到50ml錐底離心管中，蓋上蓋子。

10. 在4℃溶解2小時(shí)，每隔20分鐘輕輕震蕩。

11. 4℃，500g離心1分鐘，使溶液集中于管底。

12. 用200μl 移液器輕柔吹打使沉淀重懸。避免產(chǎn)生泡沫。將所有管中的液體集中到一個(gè)SW28離心管中。

13. 集中后的病毒懸液分裝成50μl 每份，保存在成品管中。用碎干冰速凍后儲(chǔ)存在-80 ℃。

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